TNF-α重组溶瘤腺病毒杀伤胃癌细胞实验研究

摘要：目的：研究 TNF-α重组溶瘤腺病毒 PPE3-F35-TNF-α对 SGC-7901和 MRC-5的体外杀伤作用。方法采用重组溶瘤腺病毒 PPE3-F35-TNF-α和空载体腺病毒载体 AD/CMV-EGFP 感染胃癌 SGC-7901细胞株和人成纤维细胞株 MRC-5，通过 TCID50法测定 PPE3-F35-TNF-α和AD/CMV-EGFP 的滴度及其体外繁殖能力；荧光显微镜下检测2组细胞中 EGFP(绿色荧光蛋白）的表达；MTT 法检测 PPE3-F35-TNF-α和 AD/CMV-EGFP 对6组不同细胞杀伤情况；双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测感染 PPE3-F35-TNF-α和 AD/CMV-EGFP 的 SGC-7901和MRC-5上清液中 TNF-α表达量。结果病毒增殖实验结果显示48小时后在光镜下见 PPE3-F35-TNF-α感染的 SGC-7901出现细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)，在荧光显微镜下观察到有明显的 EGFP 表达，7天后取以上细胞裂解液感染 SGC-7901，结果显示用感染 PPE3-F35-TNF-α的 SGC-7901裂解液再次感染48小时后仍可见明显的 CPE 及 EGFP 表达，其他实验为阴性结果。MTT 实验示不同滴度的 PPE3-F35-TNF-α和 AD/CMV-EGFP 感染 MRC-5及 SGC-7901、MGC-803、BGC-823、MCF-7、DCD1，7天后 MTT 法测定其细胞活力，结果表明 PPE3-F35-TNF-α对MRC-5没有杀伤作用，而对 SGC-7901均有明显的杀伤作用，而且杀伤作用与病毒浓度存在剂量依赖关系，AD/CMV-EGFP 对以上肿瘤细胞都无明显的抑制作用；MOI 为1的两种病毒分别感染上述细胞株后，在第3、5、7、9天测定细胞活力，结果显示 PPE3-F35-TNF-α对肿瘤细胞的杀伤作用随作用时间增加而增强，而 MRC-5的相对活力与感染时间不存在相关性。ELISA 检测两组细胞上清液中 TNF-α表达量示 SGC-7901感染 PPE3-F35-TNF-α和 AD/CMV-EGFP 后细胞上清液中 TNF-α的表达量分别为（1463.44±53.47）pg/ml 和（16.06±1.52）pg/ml(F=5849.310, P<0.05)，两组比较差异有统计学意义，MGC-5感染 PPE3-F35-TNF-α和 AD/CMV-EGFP 后细胞上清液中 TNF-α的表达量分别是（17.96±1.52）pg/ml 和（17.19±1.17）pg/ml(F=1.355, P>0.05)，两组比较差异有统计学意义。结论 PPE3-F35-TNF-α能选择性增殖、杀灭胃癌细胞，同时大量表达具有抗胃癌作用的 TNF-α，发挥多重抗瘤作用。